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    ELISA試劑盒實驗質(zhì)量控制

    發(fā)布時間: 2014-05-07  點擊次數(shù): 963次

    到70年代,實驗室質(zhì)量控制進入一個新的階段--全面質(zhì)量治理,推行Good Laboratory Parctice(簡稱GLP)。從1949年美國College of American Pathologists(簡稱CAP)首先開始研究臨床實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制(簡稱質(zhì)控)問題,美國學(xué)者Levery和Jenning于1950年發(fā)表*篇關(guān)于使用質(zhì)控圖的實驗室室內(nèi)質(zhì)控,臨床檢修實驗室的室內(nèi)質(zhì)控工作正式拉序幕。全面質(zhì)量治理的宗旨在于預(yù)防差錯的產(chǎn)生,質(zhì)控圖的統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的目的是檢出差錯,統(tǒng)計學(xué)的實驗室室內(nèi)質(zhì)控是全面質(zhì)量治理中的一個重要環(huán)節(jié)。衛(wèi)生部臨床檢修中央免疫質(zhì)控室從1988年開始在全國范圍內(nèi)開展乙肝標志物檢修的質(zhì)量評價流動,一直采用這一套質(zhì)量評價方法,并在實踐中不斷實踐、進步和完善,但愿能找出一條適合中國國情的,行之有效的質(zhì)量治理的道路。由于ELISA是目前臨床上zui常用的一種免疫學(xué)檢修方法,就以ELISA試劑盒檢修為例,討論下問題。
    一、質(zhì)量控制(Quaility Control,Q.C)
    質(zhì)量控制是監(jiān)視全過程,排除誤差,防止變化,維持標準化現(xiàn)狀的一個管理過程。這一過程是通過一個反饋環(huán)路進行的。
    (1)確定控制的對象;
    (2)規(guī)定控制對象的標準(預(yù)期值);
    (3)制定或選擇控制方法和手段;
    (4)測量實際數(shù)據(jù);
    (5)比較或較對實際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異,并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù)定誤差范圍,報警系發(fā)出信號,反饋通道中斷。
    (6)采取行動,解決差異?;謴?fù)原狀(原標準狀態(tài))的手段發(fā)揮作用。質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進行。質(zhì)控圖是把某一檢驗的性能數(shù)據(jù)與所計算出來的預(yù)期的"控制限"進行比較的圖。這種性能數(shù)據(jù)是在按規(guī)程正常進行時,按時間順序而抽選出來的,其目的是檢測檢驗過程中變異的"可追查"性原因。"可追逆"性的誤差原因,是指除去隨機誤差以外的其他原因。"控制限"是通過統(tǒng)計計算出來的。 
    二、誤差
    實驗誤差分為三種:系統(tǒng)誤差、隨機誤差和過失誤差。系統(tǒng)誤差是指一系列測定結(jié)果與真值或靶值存在有同一傾向的誤差,有明顯的規(guī)律性,ELISA試劑盒可在一定條件下重復(fù)出現(xiàn),是可以通過質(zhì)控預(yù)防和校正的。隨機誤差又稱偶然誤差,是一種偶然的、未能預(yù)料到的誤差,是難以避免和校正的誤差。檢驗工作中隨機誤差的分布符合正態(tài)分布規(guī)律。過失誤差是人為的責任誤差。通過加強實驗室管理和開展質(zhì)量控制工作是可以避免的。
    三、正態(tài)分布及標準差
    ELISA試驗中,檢驗同一樣本達20次以上時,就會發(fā)現(xiàn)這組數(shù)據(jù)(指測定結(jié)果的吸光值)分布在均值兩側(cè),大部分集中在均值附近。如果以測定值為橫坐標,以出現(xiàn)的頻率為縱坐標作圖,就可繪出一個呈鐘形的曲線圖。鐘頂處為均值,其他值以均值為中心對稱分布,這就是正態(tài)分布。正態(tài)曲線以下的面積稱概率,常用樣本的均數(shù)(X)和標準差(SD)來表示,其計算方法如下:均值、標準差和概率的關(guān)系如下:
     X±1SD,概率0.68 X±2SD,概率0.95 X±3SD,概率0.99換言之,當ELSIA檢測同一樣本達一定次數(shù)后所得的一組數(shù)據(jù),其中靠近均值(X)的±1SD范圍內(nèi)的數(shù)據(jù),ELISA試劑盒占該組數(shù)據(jù)的68%,在X±2SD范圍內(nèi)分布的數(shù)據(jù)占總體的95%,在X±3SD范圍內(nèi)分布的數(shù)據(jù)占總體的99%。當我們要求檢驗結(jié)果在X±2SD范圍內(nèi)為合格時,將有95%的數(shù)據(jù)可能合格。
    四、質(zhì)控圖 
    通過以上三步驟,可以開始作室內(nèi)質(zhì)控圖,根據(jù)RCVK的和SD作質(zhì)控框圖。利用質(zhì)控圖可以對每次檢驗的結(jié)果進行監(jiān)測,當沒有更換另一批號試劑盒和另一批號質(zhì)控血清時,該質(zhì)控圖可以連續(xù)作下去。  
    質(zhì)控血清的S/CO值低于-2SD的范圍,屬"告警",應(yīng)尋找原因并在質(zhì)控圖上記錄查出的原因。 
    ELISA試劑盒試驗中,各種檢驗項目的誤差允許范圍均有待在實踐中得出結(jié)論,以上只是舉例說明質(zhì)控方法,不是定論。2SD是一般*的允許誤差限度。每批測定放一份質(zhì)控血清時,一次超過2SD應(yīng)作為"告警",二次超出2SD為"失控"。當質(zhì)控過程中,出現(xiàn)失控時,出現(xiàn)失控時,應(yīng)查找原因,通常是試劑盒或質(zhì)控血清失效造成。更換試劑盒或更換質(zhì)控血清,找出原因糾正后重新檢驗。如果檢驗結(jié)果仍達不到要求或找不到原 因時,應(yīng)重復(fù)進行OCV的檢驗。如果OCV檢驗的結(jié)果仍是好的,說明常規(guī)操作出現(xiàn)問題。 
    一般認為:①一次超出3SD;②連續(xù)二次超出2SD;③3-5次連續(xù)處于一側(cè)的2SD之內(nèi);④5~7次連續(xù)偏向橫軸的一側(cè),均為失控。 
    第③、④種情況,單獨依靠記錄往往是不易察覺的,但在質(zhì)控圖上可以清晰地發(fā)現(xiàn)這種失控。
    五、ELISA試劑盒室間質(zhì)評的方法
    A、 發(fā)質(zhì)控物進行調(diào)查 
    這是國內(nèi)外室間質(zhì)評的常用形式。部臨檢中心對乙肝標志物ELISA檢驗的室間質(zhì)評采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實驗室,各實驗室在規(guī)定的日期進行檢驗,并將檢驗結(jié)果報至部臨檢中心。部臨檢中心經(jīng)統(tǒng)計分析,將評價結(jié)果寄回各實驗室。通過評價,各實驗室了解本室工作質(zhì)量,發(fā)現(xiàn)差距,并設(shè)法改進,以不斷提高檢驗質(zhì)量。 
    這種評價方式有一定缺點,即各實驗室常對質(zhì)控物特殊對待,在檢驗時選用特殊試劑盒,選派特別的技術(shù)員進行檢驗,有的實驗室互相和對結(jié)果并作修改。這就使EQA的結(jié)果不能反映該實驗室日常工作水平。
    B、 派觀察員到實驗室進行試劑調(diào)查 
    這種調(diào)查事先不通知,臨時派觀察員到實驗室,采用常規(guī)方法,檢驗規(guī)定的一組標本,進行評價。 
    這種調(diào)查方式,容易發(fā)現(xiàn)該實驗室存在的實際問題,可以直接給予指導(dǎo)和幫助,解決問題,提高檢驗質(zhì)量。這種調(diào)查通??梢允褂谜鎸崢颖?,避免采用質(zhì)控物的一些缺點。

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