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    ELISA試劑盒中非特異性顯色的原因

    發(fā)布時(shí)間: 2014-06-04  點(diǎn)擊次數(shù): 919次

        酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)自問世以來,以其敏感性高,特異性強(qiáng),操作簡便、安全,開創(chuàng)了免疫學(xué)診斷的新紀(jì)元在臨床診斷方面得到了廣泛的應(yīng)用。但是在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性顯色問題,ELISA試劑盒特異性、檢驗(yàn)標(biāo)本中含酶標(biāo)記物的干擾物,操作不當(dāng)?shù)纫蛩囟紩?huì)導(dǎo)致這樣的結(jié)果。
        影響ELISA中非特異性顯色的原因很多,如試劑盒特異性、檢驗(yàn)標(biāo)本中含酶標(biāo)記物的干擾物,操作過程中的問題。本文就這一原因作一簡要分析,以便可以通過以上措施把非特異顯色降至zui低限度,從而提高檢測的特異性,并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 
    1、ELISA試劑盒特異性因素 
    1、1 固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見。
    1、2包被物的純度。在酶聯(lián)免疫測定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。
    1、3包被抗體的效價(jià)。具有高親和力和高特異性的包被抗體,是決定試劑特異性的重要方面。 
    1、4 封閉。是ELISA中重要的一步,目的是封閉固相載體表面尚未被所占據(jù)的空隙,減少后續(xù)步驟中非特異性蛋白的干擾。 
    2、ELISA試劑盒中檢驗(yàn)標(biāo)本中含有酶標(biāo)記物的干擾物 
    2、1內(nèi)源性干擾物:類風(fēng)濕因子(RF)、黃疸等,類風(fēng)濕因子是可作用于多種動(dòng)物以及人IgGFc段的自身抗體,多數(shù)為IgM類,能充當(dāng)抗原成分與固相及酶標(biāo)抗體反應(yīng),從而呈現(xiàn)非特異性顯色。 
    2、2 外源性干擾物,常常因樣品采集、貯存、處理不當(dāng)造成如樣品溶血,被細(xì)菌污染,標(biāo)本凝集不全等。溶血標(biāo)本,紅細(xì)胞溶解破裂,釋放出血紅素形成,而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物,以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。

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