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    2015年酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備之洗滌方式

    發(fā)布時間: 2015-07-29  點(diǎn)擊次數(shù): 860次

    酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備之洗滌方式

    洗滌在ELISA試劑盒過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。可以說在ELISA試劑盒操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。
    分析洗滌的方式除某些 ELISA 儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:
    (1)浸泡式

    a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;

    b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);

    c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2 分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;

    d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;

    e.重復(fù)操作c 和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),ELISA試劑盒也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫 20,其濃度可在0.05%-0.2%
    之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
    (2)流水沖洗式流水沖洗法

    zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗 2 分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2 分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡便、快速。
    已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

    ELISA試劑盒檢測范圍:ELISA試劑盒人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動物細(xì)胞因子、植物細(xì)胞因子、骨代謝、細(xì)胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。 
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